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  • 液相色譜法檢測苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的疑難詳解

    發布于 2011/03/03閱讀(4092)來源 zxj

    摘要

    苯甲酸、山梨酸、糖精鈉雖是較常見的檢測項目,但是要得到一個準確可靠的結果,也存在一定的難度,許多新手常出現因對方法理解發生偏差而檢測出錯的事故。

    內容

    液相色譜法檢測苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的疑難詳解
     
     苯甲酸、山梨酸、糖精鈉雖是較常見的檢測項目,但是要得到一個準確可靠的結果,也存在一定的難度,許多新手常出現因對方法理解發生偏差而檢測出錯的事故。筆者根據自己多年該方面工作的實際經驗出發,以苯甲酸、山梨酸為著重點,從樣品前處理、檢測儀器的選擇、超標時的判斷等幾個易出問題的方面,進行了詳細的闡述。

    1 樣品前處理的注意事項

         GB/T5009.28-2003和GB/T5009.29-2003 在文字結構上有缺陷,在涉及用儀器法測定苯甲酸、山梨酸、糖精鈉時,只講述了液體樣品的前處理方法,沒有涉及對固體樣品的前處理。

         食品樣品往往含有大量的油脂、蛋白質,對提取極為不利;如處理不干凈也會污染色譜柱,影響檢測工作。這類樣品處理的關鍵在于如何找到一種較理想的沉淀劑,盡量排除待測樣品中的油脂、蛋白質,且不影響待測物組分的回收率。

         GB/T5009.29-2003使用5%硫酸銅溶液沉淀蛋白,對于蛋白質含量較低的食品尚可,對于豆粉、奶粉、月餅等高油脂、高蛋白樣品則沉淀效果不理想。如用10%鎢酸鈉溶液作為沉淀劑,效果好些;如用10%亞鐵氰化鉀溶液和20%醋酸鋅溶液則效果更理想(這是筆者目前用過最理想的沉淀劑)。

    具體操作步驟如下:

         取一定量樣品,搗碎,利用四分法原理稱取樣品5.0 克于50ml比色管中,加水20ml,浸泡、振蕩均勻,加入氫氧化鈉溶液(1mol/L)1.0 ml,加入9.5mL10%亞鐵氰化鉀溶液, 9.50mL 20%乙酸鋅溶液,定容,振蕩使其充分混勻后,用濾紙初濾除去沉淀物, 初濾液過0.45μm微孔濾膜,收集濾液于樣品瓶中,樣品處理液和標準有溶液各進樣5uL測定。

         用這種方法簡單易行,接觸有機試劑少,重復性和回收率都令人滿意;缺點是一定要用液相色譜法檢測,有一定局限。

         2 檢測儀器的選擇

         雖然液相色譜儀操作起來比氣相色譜儀要復雜,但筆者建議如條件許可仍盡量用液相色譜法檢測。原因如下:

    2.1 液相色譜法所用的樣品處理方法遠比氣相色譜法簡單,且不需使用有機試劑。尤其對于高油脂樣品(如月餅)若采用堿化-排油-酸化-提?。瓝]干-溶解等步驟,再上氣相色譜儀檢測,工作量大,試劑毒性也大,且結果由于處理步驟太多而難以保證準確。

    2.2 用液相色譜法還可同時完成糖精鈉項目的檢測,而氣相色譜法只能做苯甲酸、山梨酸的檢測。

    2.3 液相色譜儀所用的紫外檢測器比氣相色譜儀的氫火焰檢測器靈敏,可進行更低含量的檢測。如用二極管陣列檢測器,還可輔助定性,這更是氣相色譜氫火焰檢測器不可比擬的。

    3 選用氣相色譜儀時的注意事項

         GB/T5009.29所用的氣相色譜柱為 5%DEGS+1%磷酸固定液的60-80目 Chromosorb W AW,。這種柱有性能穩定、重復性好、保留時間穩定的優點,但同時也有穩定時間較長的缺點。

         該柱的適用的樣品提取溶劑為石油醚或乙醚,如果用甲醇或乙醇,則溶劑峰拖尾效應較大,對山梨酸的測定有影響。

         如用毛細管柱,能取得更好的峰形和靈敏度,但其穩定性及特異性不如填充柱。一般可用非極性毛細管柱,0.530mm內徑,10-15m長度。色譜條件可能需用程序升溫。

         在氣相色譜儀上的出峰次序為先出山梨酸,后出苯甲酸。

         糖精鈉不能直接用氣相色譜進行檢測,必須衍生化后才能汽化進樣。

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