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  • 噬菌體滴度的測定的方法

    發布于 2013/12/06閱讀(1699)來源 zxj標簽 理化檢測

    摘要

    噬菌體滴度的測定的方法

    內容

    在宿主細胞過量的情況下,噬斑的數量隨著噬菌體的增加呈線性增加。由于這個原因,在感染以前,要將噬菌體進行稀釋,而不是將宿主細胞稀釋。以低MOI(感染重復性)鋪板,也可確保每一個噬斑僅包含一個DNA 序列。
    材料和試劑
    1. 微波爐
    2. LB/IPTG/Xgal培養 板
    3. lb培養基
    4. 頂層瓊脂糖凝膠
    操作步驟
    1. 在5~10ml LB培養基中接種單個ER2537克隆,振搖孵育直至對數生長中期(OD600~0.5)
    2. 在細胞生長時,微波融化頂層瓊脂糖凝膠,分裝至無菌培養管內,每管3ml。維持在45℃備用。
    3. 37℃預熱LB/IPTG/Xgal培養板,備用。
    4. 以LB培養基10倍比稀釋噬菌體。
    建議稀釋范圍:對擴增的噬菌體培養上清,108-1011;對未擴增的篩選洗脫液,101-104。每次稀釋都換用新的加樣槍頭,最好使用氣溶膠阻隔槍頭以避免交叉污染。
    5. 一旦ER2537培養物長至對數生長中期,分裝至微量離心管中,每管200ml。
    6. 將倍比稀釋的噬菌體上清加入含細菌培養物的微量離心管中,一支微量離心管中僅加入一種稀釋液10ml,快速渦旋,室溫孵育1-5min。
    7. 轉移至含有45℃頂層瓊脂糖凝膠的管中,快速渦旋混勻,立即傾倒至預熱的LB/IPTG/Xgal平板上,輕緩搖動平板使頂層膠均勻分布。
    8. 冷卻平板5min,37℃倒置培養過夜。
    9. 噬斑計數以噬斑數為100左右的平皿為準,噬斑數乘以稀釋度即可獲得每10ml噬菌體的滴度-噬斑形成單位(pfu)。

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