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  • HPLC系統標準操作規程(SOP)

    發布于 2011/08/09閱讀(2035)來源 zxj標簽 液相,色譜

    摘要

    規范高效液相色譜儀的使用。規范色譜柱的使用。

    內容

    HPLC系統標準操作規程(SOP)

    1. 目的:規范高效液相色譜儀的使用。規范色譜柱的使用。
    2.范圍
    適用于高效液相色譜儀的維護使用。
    3.職責
    儀器使用者對本規程的實施負責。
    4.規程
    4.1 系統組成:
    本系統由LC-10ATvp溶劑輸送泵、Rheodyne 7725i手動進樣閥、SPD-10Avp紫外-可見檢測器、N2000色譜數據工作站、色譜柱和電腦等組成,另外還包括打印機、不間斷電源等輔助設備。
    4.2 準備
    4.2.1 準備所需的流動相,用合適的0.45μm濾膜過濾,超聲脫氣20min。
    4.2.2 根據待檢樣品的需要更換合適的色譜柱(注意方向)。
    4.2.3 配制樣品和標準溶液,用合適的0.45μm濾膜過濾。
    4.2.4 檢查儀器各部件的電源線、數據線和輸液管道是否連接正常。
    4.3 開機:
    接通電源,依次開啟不間斷電源、泵、檢測器,待泵和檢測器自檢結束后,打開打印機、電腦顯示器、主機,最后打開色譜工作站。
    4.4 參數設定
    4.4.1 波長設定:在檢測器顯示初始屏幕時,按[func]鍵,用數字鍵輸入所需波長值,按[Enter]鍵確認。按[CE]鍵退出到初始屏幕。
    4.4.2 流速設定:在泵顯示初始屏幕時,按[func]鍵,用數字鍵輸入所需的流速(柱在線時流速一般不超過1ml/min),按[Enter]鍵確認。按[CE]鍵退出。
    4.5 更換流動相并排氣泡
    4.5.1 將管路的吸濾器放入裝有準備好的流動相的儲液瓶中;
    4.5.2 逆時針轉動A/B泵的排液閥90-180°,打開排液閥;

    4.6 平衡系統
    4.6.1打開“在線色譜工作站”軟件,輸入實驗信息并設定各項方法參數后,按下“數據收集”頁的 [查看基線] 按鈕。
    4.6.2. 按泵的[pump]鍵, pump指示燈亮。用檢驗方法規定的流動相沖洗系統。
    4.6.3 檢查各管路連接處是否漏液,如漏液應予以排除。
    4.6.4 觀察泵控制屏幕上的壓力值,壓力波動應不超過0.5MPa。如超過則可初步判斷為柱前管路仍有氣泡,按4.5重復操作。
    4.6.5 觀察基線變化。如果沖洗至基線漂移<0.01mV/min,噪聲為<0.001mV時,可認為系統已達到平衡狀態,可以進樣。
    4.7 進樣
    4.7.1 進樣前按檢測器[zero]鍵調零,按軟件中 [零點校正] 按鈕校正基線零點,再按一下 [查看基線] 按鈕使其彈起。
    4.7.2 用試樣溶液清洗注射器,并排除氣泡后抽取適量。
    4.8.色譜柱的使用
    4.8.1 色譜柱選擇:根據擬定的質量標準選擇C8、C18、SIL等類型,一般首選短柱(可節約時間及試劑),遇到不能分離情況可考慮長柱。
    4.8.2 色譜柱使用:對色譜柱說明仔細閱讀;使用相同類型預柱;應保證流動相PH在色譜柱適應范圍內(ph 2-8);保證柱壓在可接受范圍內(小于18MKP)。
    4.8.3色譜柱清洗:
    反相柱(C8、C18)
    流動相含鹽(可將加酸、加三乙胺等情況并入),以乙腈-水(5:95)沖洗30倍柱體積以上(可視具體情況增加沖洗量)。然后以甲醇沖洗20倍柱體積以上。
    流動相不含鹽 以流動相沖洗20倍柱體積以上,然后以甲醇沖洗20倍柱體積以上。
    流動相為添加離子試劑:以乙腈-水(5:95)沖洗50倍柱體積以上(可視具體情況增加沖洗量)。然后以甲醇沖洗30倍柱體積以上。使用離子試劑色譜柱一般為專用,不建議用作其他項目測定。
    正相柱
    流動相含鹽 以不含鹽流動相沖洗30倍柱體積以上,再以正己烷沖洗20倍柱體積以上。如流動相極性與正己烷有較大差異,可在流動相沖洗后,以異丙醇低速沖洗進行過渡(注意以異丙醇為流動相流速不得超過0.5ml/min)。
    流動相不含鹽 以流動相沖洗20倍柱體積以上,再以正己烷沖洗20倍柱體積以上。如流動相極性與正己烷有較大差異,可在流動相沖洗后,以異丙醇低速沖洗進行過渡(注意以異丙醇為流動相流速不得超過0.5ml/min)。
    4.8.4色譜柱保養
    色譜柱不使用時,務必將兩端密封。
    對色譜柱不得有劇烈的震動或敲打等行為。
    對于長期未使用的色譜柱,定期對其封存溶劑進行置換。

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