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  • BECKMAN 125型高效液相色譜儀使用的標準操作程序(SOP)

    發布于 2011/04/20閱讀(2242)來源 zxj標簽 液相操作

    摘要

    規范BECKMAN 125型高效液相色譜儀的使用操作,保證高效液相測量結果的準確性。

    內容

    BECKMAN 125型高效液相色譜儀使用的標準操作程序(SOP)

    1. 適用范圍
    本標準適用于BECKMAN 125型高效液相色譜儀的使用操作。
    2. 目的與意義
    規范BECKMAN 125型高效液相色譜儀的使用操作,保證高效液相測量結果的準確性。
    3. 責任
    質量分析人員全面負責本SOP的實施。
    4. 儀器的組成
    本系統由SYSTEM GOLD? 125溶劑輸送泵、SYSTEM GOLD? 166檢測器(190~360 nm)、Rheodyne 7725i手動進樣閥、HT-330 柱溫箱、BECKMAN色譜工作站、打印機等組成。
    5. 操作步驟
    5.1. 準備
    5.1.1準備所需的流動相,用合適的0.45μm濾膜過濾,超聲脫氣20min。
    5.1.2根據待檢樣品的需要更換合適的色譜柱(注意方向)。
    5.1.3配制樣品和標準溶液,用合適的0.20μm濾膜過濾。
    5.2. 開機
    接通電源,依次開啟泵、檢測器開關,打開計算機進入win2000操作系統,雙擊桌面的32 Karat圖標進入主菜單對話框,雙擊Instrument圖標進入色譜分析界面(包括Direct Control、Det166、Instrument Setup等界面)。
    5.3. 創建分析方法
    可在Direct Control界面直接點擊各設備單元的圖像進行流動相比例、流速、最大壓力限、最小壓力限、檢測波長以及檢測器開啟與關閉等參數的設定,亦可點擊 “Methed/Instrument Setup” 進行相應的設定,然后點擊 “File/Methed/Save As”保存設定的方法。
    5.4. 更換流動相并排氣泡
    將管路的吸濾器放入裝有流動相的儲液瓶中,逆時針轉動排液閥90-180°,打開排液閥;設流速為5ml/min,沖洗3min后設流速為0停泵,將排液閥順時針旋轉到底,關閉排液閥。如管路中沒有氣泡,則排氣泡操作可省略;如管路中仍有氣泡,則重復以上操作直至氣泡排盡。
    5.5. 平衡系統
    用流動相沖洗至基線漂移<0.001AU/min,噪聲為<0.0005 AU時,可認為系統已達到平衡狀態,可以進樣。
    5.6. 輸入樣品信息
    點擊“Control/Single Run”,在Sanple ID(樣品名稱)、Method(方法)、Data path(保存路徑)、Data file(文件名)輸入相應的信心,然后點擊Submit提交。
    5.7. 進樣
    在“Direct Control”界面點擊AutoZero鍵調零;用進樣針定量吸取樣品溶液,在進樣閥處于INJECT狀態下插入進樣針;逆時針轉動進樣閥手柄,在LOAD狀態下推針進樣,再順時針轉動進樣閥手柄使其回至INJECT狀態即完成進樣操作5.8. 報告輸出與打印
    在主菜單對話框內右擊Instrument圖標,點擊“open offline”進入離線分析界面。
    5.8.1系統默認報告格式:點擊“File/Data/New”打開相應文件后,點擊“Report/View/Area%”。
    5.8.2自定義報告格式:點擊“File/Data/New”打開相應文件后,在該界面中單擊鼠標右鍵,點擊“Graphical programming/Define Peaks”,在色譜圖中單擊自定義峰的起始和終點位置,點擊“File/Method/Save”進行方法保存;點擊“Report/Analyze”,進行自定義報告的分析;點擊“Method/Custom Report”,在彈出的界面中分別點擊“Insert field”、“Insert Graph/Data Graph”和“Insert Report/Run Report”即可分別插入常規信息、圖譜、數據,從而完成自定義報告。
    完成報告輸出后,點擊“Report/Print/Area%”或者“Report/Print/ Custom Report”即可打印報告。
    5.9 關機
    5.9.1 測定完畢后,在Direct Control界面點擊檢測器圖標關閉紫外燈。
    5.9.2色譜柱的沖洗
    5.9.2.1反相柱(C8、C18):流動相含鹽的(可將加酸、加三乙胺等情況并入),以乙腈-水(5:95)(乙腈可用甲醇代替,下同)沖洗30min(可視具體情況增加沖洗時間,下同),然后以乙腈沖洗20 min以上;流動相不含鹽的,以流動相沖洗10 min以上,然后以甲醇沖洗20 min以上;流動相添加離子試劑的,以乙腈-水(5:95)沖洗45 min以上,然后以乙腈沖洗20 min以上。流速一般設為1ml/min。
    5.9.2.2正相柱:流動相含鹽的,以不含鹽流動相沖洗30 min以上,再以正己烷沖洗20 min以上(如流動相極性與正己烷有較大差異,可在流動相沖洗后,以異丙醇低速沖洗進行過渡,注意以異丙醇為流動相流速不得超過0.5ml/min,下同);流動相不含鹽的,以流動相沖洗20 min以上,再以正己烷沖洗20 min以上。
    5.9.3 停泵,逐級關閉工作站窗口,關閉計算機及儀器各部件電源開關。
    5.10 填寫儀器使用記錄
    6.注意事項
    6.1 流動相及樣品溶液必須用0.45um濾膜過濾,流動相還要進行脫氣處理。
    6.2進樣量最少為定量環體積的3至5倍,即20μl的定量環最少進樣60至100μl的樣品,這樣才能完全置換樣品定量環內殘留的溶液,達到所要求的精密度及重現性。推薦采用100ul的平頭進樣針配合20ul滿環進樣。
    6.3 待泵的壓力穩定后,方可開啟檢測器。
    6.4 試驗結束后,待泵的壓力逐步降為0后,方可關閉泵的電源。
    6.5 仔細閱讀色譜柱說明書,保證色譜柱系統的適應性(流動相pH 2-8;柱壓小于2.5 KPSI)。

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