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  • HP1100液相色譜儀使用操作規程

    發布于 2011/04/29閱讀(2458)來源 zxj標簽 安捷倫液相

    摘要

    HP1100液相色譜儀使用操作規程總流程:超純水沖洗柱——流動相分離樣品——超純水沖洗柱 ——純乙睛保存柱

    內容

    HP1100液相色譜儀使用操作規程

    1. 電源準備
    打開穩壓器( )電源開關,須待電壓指示至 220V 后,才能開啟其他有關設備。
    2. HP1100 高效液相色譜儀的準備 
       
        試劑:三氟乙酸 
        乙腈(Fisher 公司產品色譜純)
        超純水(Millipore 超純水)
        冰乙酸
        溶液配置:貯液瓶與流動相的準備
        A 液 0.1%三氟乙酸 (三氟乙酸 1ml,超純水 999ml)室溫保存
        B 液 60%乙腈 (乙腈 600ml, 超純水 400ml)室溫保存
        樣品液 0.01%乙酸 (冰乙酸 10   l 超純水 100ml)室溫保存
        泵頭沖洗液:精濾后超純水或者是 1%色譜純甲醇 室溫保存
        注:貯液瓶應用超純水淌洗干凈,備用。
        流動相溶劑用潔凈 G4 玻沙漏斗精濾除去微小顆粒(目前未濾過溶液)。 
        操作者必須清楚并注明 A、B 貯液瓶盛裝為何種溶劑。
        沖 洗 泵 頭 : 用 注 射 管 于 軟 塑 料 管 末 端 抽 吸 至 有 水 流 出 , 調 節 流 速 開 關 控 制 流 速 為20-30drop/min.(目前我們很少沖泵頭。)
        ① 流動相管道排氣
        如果,管道中氣泡較多,可通過彈擊管道,排除氣泡,并逆時針旋轉脫氣泵活塞使其松動,用注射管于流動相出口的塑料管末端抽吸至管道內氣泡排除完全。操作時,我們通常已經打開了脫氣機(氣泡嚴重影響分離效果,所以觀察管道中液體是否有氣泡非常重要。)
        ② 開機
        ③ 進入 HP1100 操作系統
        a.雙擊 WIN-95 操作界面中左下角 Instrument 1 online 圖標,進入 HP1100 工作站軟件操作界面。單擊工作站操作界面上方 Run control 菜單,在下拉菜單中找到 Sample Info 子菜單,單擊。在 Sample Info 信息框內定義操作者、樣品前綴及編號、保存路徑等參數。在保存路徑項下,將可定義子目錄分別輸入操作者拼音縮寫,以方便檢索時互不干擾。
        b.等待工作站操作界面中泵、柱溫箱、檢測器各指示圖標由灰色轉變為綠色后,單擊泵、檢測器各圖標可從其各自彈出的菜單中設定流動相各溶劑比例、流速等。
         (1) 流速通常為 1ml/min。檢測波長通常為 280,或者 254nm。
         (2) A 液設置為 100%,運行 15-30 分鐘(目的是色譜柱的預平衡),觀察基線走勢,基線應為直線,通過單擊“Balance”鍵可將基線調至零點。待基線平穩后可進樣。 
         (3) 調整 A 液為 0,B 液為 100%再運行 60 分鐘(此時乙腈實際濃度為 60%)
          (4) 在 A 液沖洗同時進行進樣環的沖洗:用 500ul 的針樣注射器,在 load 狀態,注入超純水 500ul。(反復三次,若是 20ul 進樣環,則加入 20ul 以上,多余的水可廢液管流出。通常同一樣品上樣 30 次后應沖洗進樣環,如果不同樣品,最好,每次上樣前均進行沖洗。)
         (5) 吸取一定量可直接進樣的樣品溶液(上樣液最好用濾器濾過),將進樣閥逆時針旋至Load 檔,將進樣針從進樣孔處水平推入,按進樣器活塞將樣品溶液注射入進樣環后,立即將進樣閥順時針方向旋至 Inject 檔,與此同時,數據開始自動收集。
         (6) 此時樣品分析已經完成。在 HP1100 主操作界面的檢測器圖標,關閉檢測器,然后關閉色譜儀主機檢測器開關(目的是延長檢測器壽命)。將 B 通道調為 0,A 通道調為 100%,即 A 液沖洗色譜柱約 10-30min。用 A 液續沖洗色譜柱約 10-30m(目的是沖出柱內殘留的雜質)
         (7) A 通道換為 C 通道(100%乙腈)續沖洗色柱約 10-30min。(目的主要為保護柱)
        ④ 數據記錄的終止與保存
        電腦將自動收集并保存數據,終止運行后,將自動彈出數據框,或者可通過 DATA ANALYSIS菜單,調出資料。 
    3. 圖譜處理
    4. 關機
        1) HP1100 的關閉
        在 HP1100 的主操作界面上分別單擊關閉泵、檢測器圖標,或通過菜單關閉 。然后,單擊HP1100 的主操作界面右上方“X”,退出 Instrument 1 online 程序,返回至 WIN-95 操作界面。單擊左下角“Start”菜單,單擊“Shut down”,等待關機,待出現“Restart”提示后,按電腦主機電源鍵,關閉電腦主機及顯示器。將所有使用儀器用布蓋好。關閉排氣扇、空調與穩壓器開關。
        2) 清潔衛生
        實驗完畢后,打掃儀器室桌面與地面清潔,保持桌面整潔。
        3) 儀器使用記錄
        記錄當天的儀器使用情況于指定記錄本上,包括儀器使用起止時間與出現問題的解決方案,并簽上操作者的名字.

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