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  • 如何利用凱氏定氮儀測試豆奶粉中的蛋白質

    發布于 2015/01/22閱讀(1589)來源 hj1

    摘要

    如何利用凱氏定氮儀測試豆奶粉中的蛋白質

    內容

    如何利用凱氏定氮儀測試豆奶粉中的蛋白質

    【GB/T 5009.5—1985】
    食品中蛋白質的測定方法
    本標準適用于各類食品中蛋白質的測定。
    1、原理
    蛋白質是含氮的有機化合物。食品與硫酸和催化劑一同加熱消化,使蛋白質分解,分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨。然后堿化蒸餾使氨游離,用硼酸吸收后再以硫酸或鹽酸標準溶液滴定,根據酸的消耗量乘以換算系數,即為蛋白質含量。
    2、試劑
    所有試劑均用不含氨的蒸餾水配制。
    2.1 硫酸銅。
    2.2 硫酸鉀。
    2.3 硫酸。
    2.4 2%硼酸溶液。
    2.5 混合指示液:1份0.1%甲基紅乙醇溶液與5份0.1%溴甲酚綠乙醇溶液臨用時混合。也可用2份0.1%甲基紅乙醇溶液與1份0.1%次甲基藍乙醇溶液臨用時混合。
    2.6 40%氫氧化鈉溶液。
    2.7 0.05N硫酸標準溶液或0.05N鹽酸標準溶液。
    3、儀器
    KA-1全自動定氮儀

    4、操作方法
    4.1 樣品處理:精密稱取0.2~2.0g固體樣品或2~5g半固體樣品或吸取10~20ml液體樣品(約相當氮30~40mg),移入干燥的 100ml或500ml定氮瓶中,加入0.2g硫酸銅,3g硫酸鉀及20ml硫酸,稍搖勻后于瓶口放一小漏斗,將瓶以45°角斜支于有小孔的石棉網上。小心加熱,待內容物全部炭化,泡沫完全停止后,加強火力,并保持瓶內液體微沸,至液體呈藍綠色澄清透明后,再繼續加熱0.5h。取下放冷,小心加20ml 水。放冷后,移入100ml容量瓶中,并用少量水洗定氮瓶,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混勻備用。取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸按同一方法做試劑空白試驗。
    4.2 按圖裝好定氮裝置,于水蒸氣發生瓶內裝水至約2/3處,加甲基紅指示液數滴及數毫升硫酸,以保持水呈酸性,加入數粒玻璃珠以防暴沸,用調壓器控制,加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水。
    4.3 向接收瓶內加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示液1滴,并使冷凝管的下端插入液面下,吸取10.0ml樣品消化稀釋液由小玻杯流入反應室,并以10ml水洗滌小燒杯使流入反應室內,塞緊小玻杯的棒狀玻塞。將10ml 40%氫氧化鈉溶液倒入小玻杯,提起玻塞使其緩緩流入反應室,立即將玻塞蓋緊,并加水于小玻杯以防漏氣。夾緊螺旋夾,開始蒸餾。蒸氣通入反應室使氨通過冷凝管而進入接收瓶內,蒸餾5min。移動接受瓶,使冷凝管下端離開液面,再蒸餾1min。然后用少量水沖洗冷凝管下端外部。取下接收瓶,以0.05N硫酸或0.05N鹽酸標準溶液滴定至灰色或藍紫色為終點。
    同時吸取10.0ml試劑空白消化液按4.3操作。
    4.4 計算
    式中:X——樣品中蛋白質的含量,%;
    V1——樣品消耗硫酸或鹽酸標準液的體積,ml;
    V2——試劑空白消耗硫酸或鹽酸標準液的體積,ml;
    N——硫酸或鹽酸標準溶液的當量濃度;
    0.014——1N硫酸或鹽酸標準溶液1ml相當于氮克數;
    m——樣品的質量(體積),g(ml);
    F——氮換算為蛋白質的系數。蛋白質中的氮含量一般為15~17.6%,按16%計算乘以6.25即為蛋白質,乳制品為6.38,面粉為5.70,玉米、高粱為6.24,花生為5.46,米為5.95,大豆及其制品為5.71,肉與肉制品為6.25,大麥、小米、燕麥、裸麥為5.83,芝麻、向日葵為 5.30。

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