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  • 乳和乳制品中黃曲霉毒素M1的檢測方案

    發布于 2012/02/22閱讀(1410)來源 zxj標簽 乳制品檢測

    摘要

    乳和乳制品中黃曲霉毒素M1的檢測方案

    內容

    乳和乳制品中黃曲霉毒素M1的檢測方案
      

    近日,蒙牛純牛奶被檢測出強致癌物——黃曲霉毒素M1,消息一出頓時又掀起一股食品安全隱患的討論。相比之前的三聚氰胺,黃曲霉素是否更難檢測?
    現整理出全套的專業檢測方案,讓乳和乳制品中黃曲霉毒素M1無處躲藏。
    1. 試用范圍
    牛奶,奶粉,發酵乳,干酪,奶油等乳制品
    2. 方法原理
    黃曲霉毒素M1易溶于極性溶劑,因此均勻基質中的黃曲霉毒素M1可以通過甲醇/水震蕩分散提取,對于高脂肪/油含量的樣品基質加入正己烷予以脫脂。本方法采用免疫親和柱凈化,熒光檢測器測定乳制品中黃曲霉毒素M1。
    3. 所需設備和耗材
    黃曲霉毒素免疫親和柱:Welchrom? IAC (1ml,25支/盒;3ml,15支/盒)(上海本昂提供);
    高效液相裝置帶熒光檢測器;
    均質機;
    水平振蕩器;
    SPE轉接頭及50ml大容量上樣器:Welchrom? SPE Adapter(上海本昂提供);
    分析天平(精度0.02 g);
    SPE裝置帶抽真空系統:Welchrom?  SPE Device(上海本昂提供);
    黃曲霉毒素M1標準品;
    PBS 緩沖溶液:稱取1.16 g Na2HPO4,0.20 g KH2 PO4,8 g NaCl和0.2 g KCl 溶于900ml水中,用HCL或NaOH調節pH至7.4,然后定容至1000ml;
    甲醇(色譜純);
    乙腈(色譜純);
    正己烷(分析純)。
    4. 樣品前處理
    牛奶樣品
    1. 稱取25g(精確至0.01 g)混勻的樣品,置于50 mL具塞離心管中,水浴加熱至35℃~37 ℃,6000 r/min下離心10 min。收集全部上清液,待凈化;
    2. 發酵乳(包括固體狀、半固體狀和帶果肉型)
    3. 稱取25 g(精確至0.01 g)混勻的樣品,用0.5mol/L的NaOH溶液調節pH值至7.4,9500r/min下均質5 min,水浴加熱至35℃~37 ℃,6000 r/min下離心10 min。收集全部上清液,待凈化。
    4. 乳粉和粉狀嬰幼兒配方乳制品
    5. 稱取10 g(精確至0.01 g)樣品置于250 mL燒杯中,加入50 mL約50 ℃的水于乳粉中,玻璃棒攪拌均勻。溶解后冷卻至室溫,移入100 mL容量瓶中,水洗燒杯并轉移洗滌液,用PBS定容至刻度后裝入離心管6000轉/分鐘下離心15 min,混合上清液,取50mL上清液待凈化。
    干酪
    切取均質的樣品5g(精確至0.01 g)于50 mL離心管中,加2 mL水和30 mL甲醇,9500 r/min下勻漿5 min,超聲提取30 min,6000r/min下離心10 min。收集上清液并移入250 mL分液漏斗中,同時加入30 mL正己烷,振搖2 min,分層后,棄去正己烷層。重復用正己烷提取2次。提取液減壓濃縮至約2 mL,轉移濃縮液至離心管,燒瓶用甲醇-水溶液(1+4)5 mL分2次洗滌并倒入50 mL離心管中,加PBS溶液稀釋至50 mL,6000r/min下離心5 min,上清液待凈化。
    奶油
    稱取5g(精確至0.01 g)試樣,置于50 mL燒杯中,用20 mL正己烷將其溶解并移于250mL具塞錐形瓶中。加20 mL水和30 mL甲醇,振蕩30 min后,將全部液體移于分液漏斗中,待分層后,將下層溶液全部移到100 mL圓底燒瓶中,旋轉蒸發儀減壓濃縮至約5 mL,加PBS稀釋至約50mL,待凈化。
    5. 免疫親和柱凈化(3cc)
    1. 將IAC裝于固相萃取裝置上,接上大體積上樣器,10ml PBS溶液活化柱子,流速保持在2–3 ml/min,確保上樣前柱子保留少量(0.5ml)的PBS溶液,活化液不收集;
    2. 將待凈化液加入免疫親和柱,流速不超過5 mL/min,不收集流出液;
    3. 用約20ml去離子水淋洗柱子,流速不超過5 mL/min,抽真空1分鐘,不收集流出液;
    4. 用1.5ml甲醇洗脫,流速控制在1d/s,收集洗脫液過膜后上機測試。
    注:免疫親和柱從冰箱去除需升到室溫后使用
    6. 色譜條件:
    色譜柱:   Ultimate? XB-C18 250 mm x 4.6 mm,5μm(上海本昂提供)
    預柱:     Ultimate? C18,5μm,ULT5BG18(上海本昂提供)
    流動相:   水:甲醇:乙腈=11:4:5
    柱溫:     35℃
    檢測波長: 發射波長:365nm,激發波長:450nm
    進樣量:   100μL

     

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