氧化苦參堿是從豆科槐屬植物苦豆子(Sophora alopecuroides L.)及苦參(Sophora flavescens Ait.)根中提取分離得到的一種雙稠哌啶衍生物?，F代藥理學研究表明氧化苦參堿具有抗心率失常、抗炎、抗腫瘤等作用^［1，2］。據文獻報道氧化苦參堿血藥濃度的測定方法有離子對比色法^［3］、毛細管氣相色譜法^［4］等，本文用高效液相色譜法測定了人血漿中的氧化苦參堿含量，此方法具有專屬性強、血漿用量少、檢測靈敏度高、測定穩定性好、快捷方便等特點。
1　儀器與試藥
LC－10A高效液相色譜儀，SPD－10A紫外檢測器，C－R7Ae色譜數據處理器(日本島津)；FZQ－2型旋渦混合器；LN－9527－01型高速離心機(美國雅培公司)。
氧化苦參堿對照品：批號為0780－9703(中國藥品生物制品檢定所提供，丙酮重結晶后使用)。甲醇、己烷為色譜純，其余試劑均為分析純。
氧化苦參堿對照品儲備液：精密稱取氧化苦參堿適量，用水溶解制成濃度為200 mg^.L^-1的溶液，置4 ℃冰箱內保存備用。
受試者：4名，年齡22～25歲，體重76～90 kg，均為健康男性。
2　色譜條件
Spherisorb－SiO₂不銹鋼柱(250 mm×4.6 mm)5 μm；流動相：甲醇一正己烷(4∶1)，每100 mL加28 %氨水1.2 mL。流速：2.0 mL^.min^-1；檢測波長：220 nm。
3　血漿樣品處理
精密吸取血漿樣品0.5 mL，置10 mL離心管中，加入0.8 mol^.L^-1高氯酸1.0 mL，混旋振蕩1 min，離心5 min(3000 r^.min^-1)，將上清液全部轉移至10 mL離心管中，加入20 %氫氧化鈉溶液0.35 mL，用氯仿－正丁醇混合液(98∶2) 3 mL混旋振蕩提取2次，每次2 min，離心3 min(3000 r^.min^-1)，合并有機相，在70 ℃水浴中氮氣吹干，將殘留物準確用200 μL甲醇溶解，離心3 min(10000 r^.min^-1)，取20 μL進樣分析，血漿色譜圖見圖1。
4　標準曲線制備
精密吸取健康人空白血漿0.5 mL，共7份，置7支10 mL離心管中，定量加入氧化苦參堿對照品儲備液，使其濃度分別為1.2、2.4、4.8、7.2、12.0、24.0、36.0 mg^.L^-1，按“樣品處理方法”項下操作，進行色譜分析，以氧化苦參堿峰面積A對濃度C(mg^.L^-1)進行線性回歸，得回歸方程：
A=12912.65C-5426.69　r=0.9999　n=3
當S/N=2時，最低檢出濃度為0.1 mg^.L^-1。

A.      空白血漿　B.氧化苦參堿血漿樣品
1.氧化苦參堿(11.2 min)

 

5   回收率試驗
分別于0.5 mL空白血漿中定量加入氧化苦參堿對照品儲備液，使其濃度分別為1.2、4.8、12.0、36.0 mg^.L^-1，按“樣品處理方法”項下操作，由標準曲線計算求得的血藥濃度與實際濃度之比即為本方法的回收率。結果見表1。

6　精密度試驗
分別在“回收率試驗”項下4種血藥濃度水平上進行日內與日間(5 d)精密度考察。

7　穩定性試驗
　　取正常人空白血漿5 mL，定量加入氧化苦參堿對照品儲備液，使其濃度為4.8 mg^.L^-1，分為三組，每組三管，每管0.5 mL。第一組立即處理并測定；第二組立即處理后殘渣置-20 ℃冰箱1周后測定；第三組血漿樣品置-20 ℃冰箱1周后處理并測定。結果表明，第二、第三組相對第一組的含量分別為98.8 %和102.5 %，表明氧化苦參堿穩定性良好。
8　樣品測定
4位健康志愿者肌肉注射氧化苦參堿注射液300 mg，給藥后的5、10、20、30、40、60、90、120 min定時靜脈取血2 mL。分離血漿，取0.5 mL按“血漿樣品處理”項下操作，測定氧化苦參堿含量，以給藥時間為橫坐標，血漿中的氧化苦參堿濃度的對數為縱坐標繪制藥時曲線

9　討論
本文曾采用C₁₈柱及氨基鍵合柱作為分離柱，以甲醇、水、乙腈等作為流動相，試圖對氧化苦參堿血漿樣品進行分離，但均未取得成功，最終以硅膠柱為分離柱，甲醇—己烷(4∶1)為流動相，獲得了理想的分離及峰形。流動相中適當加入氨水可以很好地改善氧化苦參堿的峰形?！　⊙趸鄥A極性較大，很難被有機溶劑提取，在強堿性條件下以游離堿形式存在時在氯仿中具有較好的溶解性，因此我們采用了氯仿—正丁醇混合液提取法，結果十分理想。用高氯酸沉淀血清蛋白后，氫氧化鈉溶液的加入量是影響氧化苦參堿提取率的關鍵因素，實際測定中，20 %氫氧化鈉的加入量超過0.30 mL時氧化苦參堿的提取率較高。
有人曾用三氯醋酸作為血清樣品提取前的蛋白沉淀劑^［5］。在本實驗條件下采用它，血清峰較復雜，對氧化苦參堿的分離有干擾，所以我們用高氯酸作為蛋白沉淀劑，結果滿意。